La discesa dei Luminosi (Y) (Italian Edition)

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Infine, immunofluorescenza standard deve essere utilizzata per determinare se la disposizione, dimensione e numero di cellule in fase tessuti accoppiati sono uguali. Il protocollo descritto qui utilizza GFP all'etichetta giunzioni aderenti e valutare morfogenesi delle cellule del pigmento negli occhi pupa.

Questa strategia potrebbe essere facilmente modificato per altri scopi ad esempio, per valutare fotorecettori morfogenesi. Per un approccio a doppia etichettatura, ulteriore UATransgeni S che etichettano gli altri componenti cellulari di interesse ad esempio vescicole segretaria, reticolo endoplasmatico, nucleo con tag non GFP potrebbero essere incorporati. RFP, DsRed e mCherry, per esempio, hanno dimostrato di essere le etichette poveri per l'imaging l'occhio pupa per i periodi prolungati necessarie per catturare patterning cellule del pigmento dati non riportati. You must be signed in to post a comment.

Please sign in or create an account. Skip to content Developmental Biology. Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access: Seletto bianco pre-pupe di genotipi appropriati e posto in provette da 1,5 ml microcentrifuga.

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Se le pupe esprimere DCR-2, selezionare pupe maschio o femmina: Pupe dovrebbe essere sessuato a 0 hr APF prima pigmentazione caso pupa - gonadi di maschi sono visibili come grossi globi trasparenti ai lati laterali della pupa circa un terzo del posteriore. Per prevenire l'essiccamento del luogo pupe a 10 cm 2 pezzo di tessuto, imbevuto di acqua distillata, nella punta-box. Incubare per momento opportuno. Vedi Rappresentante Risultati per ulteriori discussioni su quando i comportamenti di cellule specifiche sono meglio rispettati.

Posizionare un pezzo di nastro biadesivo fresco su un piatto dissezione sylgard nero. Posizionare un lato pupa, dorsale in su, con la testa della pupa aderito al nastro biadesivo Figura 1A. Try a non aderire toracica e addominale regioni della pupa al nastro biadesivo. Con una pinza con attenzione sollevare e rimuovere il opercolo per esporre la testa pupa. Strappo lungo il lato del caso pupa per esporre l'area intorno a un occhio. Rimuovere delicatamente la pupa del nastro adesivo. Montaggio Costruire un piccolo 15 millimetri 2 telaio da carta assorbente e un buco nel middlethat 5,5 mm di diametro Figura 1B.

Immergere in acqua distillata e posto inil centro di un vetrino da microscopio. Usando una siringa da 30 cc, spremere un anello uniforme di vaselina per circondare la cornice di carta assorbente. Aggiungere una piccola goccia di vaselina direttamente sul vetrino, nel foro punzonato nella carta assorbente Figura 1C Accuratamente organizzare la pupa, sul suo lato, sostenuto dal tallone vaselina Figura 1D. Posizionare un coprioggetto sulla parte superiore dell'anello di vaselina in modo che viene a contatto con l'epitelio sopra neuroepitelio occhio Figura 1D.

Comprimere delicatamente la preparazione per sigillare il vetrino contro la vaselina e generare una piccola superficie di contatto piatta tra la regione occhio pupa e il vetrino. Ogni 7 min cattura sezioni seriali attraverso il dominio apicale neuroepitelio dell'occhio, nella regione delle giunzioni adherens. In questi casi sovracampionamento tessuto estendendo la z-stack fino a fuoco fette vengono acquisiti per l'intero settore. Proseguire l'imaging per 3 a 4 ore. Utilizzare software appropriato deconvoluzione per ridurre sfondo e migliorare il contrasto delle immagini della sezione seriale.

Selezionare il pannello Strumenti, selezionare 3D Deconvoluzione e fare clic su Applica. Generare immagini un massimo di proiezione MP per ogni file di stack deconvoluto: Selezionare il pannello Strumenti, selezionare Proiezione 3D e fare clic su Applica. Post-Imaging pupa Rescue e fenotipo di verifica Per affrontare se artefatti sono stati introdotti o la pupa danneggiato durante l'imaging, rimuovere con attenzione la pupa del rig immagini: Esaminare attentamente il fenotipo dell'occhio adulti e confrontare agli occhi di mosche adulte emergono dalla mosca croce originale. Immagine Automatico Allineamento Immagine: Di conseguenza, i centri di immagini riuniti in momenti successivi non possono corrispondere allo stesso punto nel tessuto Drosophila.

Per evidenziare i comportamenti delle singole celle e ridurre le distrazioni causate dalla crescita organismal, allineare ogni deputato image. Dalla scheda File del menu principale, script aperti e selezionare i file di carico in Stack. Se i livelli non sono nell'ordine corretto, trascinarli fino a quando non sono ordinatecorrettamente. Selezionare Allineamento automatico livelli dalla scheda Modifica del menu principale. Scegli riposizionare e fare clic su OK.

Se l'algoritmo Auto-Align non orientare i fotogrammi di un punto di riferimento rilevante, apportare piccole modifiche utilizzando lo strumento Sposta.

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Out-of-focus regioni di un'immagine iniziale MP possono essere affilate da 'coltivazione' della corrispondente pila deconvoluto nel software LAS AF. Ritaglio di un file di stack permette di limitare manualmente l'intervallo di un z-stack che viene sottoposta all'algoritmo massima proiezione.

Individuare la funzione Ritaglia nel pannello Strumenti nella scheda Process. Limitare manualmente le fette iniziali e finali tale da colpire solo la cinghia aderenza all'interno della regione inizialmente fuori fuoco. Generare un nuovo proiezione massima per lo stack ottimizzato a livello locale e l'esportazione come file TIFF. In the software di editing delle immagini vedi Tabella dei Materiali , script aperti situati nella scheda File del menu principale e selezionare Carica file in Stack.

Importare il file immagine MP iniziale e file MP ottimizzato localmente per un particolare punto di tempo nel pannello Livelli di carico e selezionare OK. Selezionare entrambi gli strati negli strati riquadro e quindi selezionare Fusione automatica livelli che si trova nella scheda Modifica del menu principale per mascherare automaticamente le regioni competenti delle due immagini, ottenendo una uniforme a fuoco campo retinico.

Salva questa immagine composita come file TIFF. Ripetere i passaggi 5. Se necessario, utilizzare lo strumento Ritaglia per ridurre il campo visivo di una dimensione e forma desiderata. Utilizzare la regolazione del livello di singoli fotogrammi per contribuire a migliorare il contrasto tra la membrana cellulare e corpo cellulare. Per ragioni stilistiche e per sottolineare comportamenti cellulari specifici, introdurre falsi colori per evidenziare i punti di interesse in ogni fotogramma.

Aprire il pannello Animazione dalla scheda di Windows del menu principale. Selezionare Crea fotogrammi dai livelli dal menu che si trova nell'angolo in alto a destra del riquadro Animazione. Si noti che gli strati vengono aggiunti al riquadro di animazione in ordine sequenziale a partire dal fondo della pila. Per invertire l'ordine dei fotogrammi, prima selezionare tutti i fotogrammi e selezionare Inverti fotogrammi dal menu del riquadro Animazione. Selezionare un tempo di ritardo fotogramma per ciascun fotogramma utilizzando il menu a discesa sotto il pollice telaiochiodo.

Dalla scheda File del menu principale, aperto Esporta e selezionare rendering video. Scegli QuickTime Export in Opzioni file e selezionare un formato video desiderato.

Sotto rendering Opzioni impostare Frame Rate di ordinazione, inserire un frame rate di 15, e fare clic su Render. Tuttavia, a causa del gradiente di sviluppo pronunciato proponiamo descrivere patterning occhio secondo i seguenti eventi: A subscription to J o VE is required to view this article. You will only be able to see the first 20 seconds. I ricercatori utilizzando il paradigma del mondo visivo intendono dedurre la comprensione di una lingua parlata da movimenti oculari dei partecipanti nel mondo visivo.

I due fattori seguenti sono tra i comuni che devono essere considerati. D'ora in poi, movimenti oculari osservati in questo periodo di anteprima forniscono una linea di base per determinare l'effetto dell'input linguistico. Per illustrare come si svolge un tipico eye-tracking studio utilizzando il paradigma del mondo visivo, il seguente protocollo descrive un esperimento adattato da L.

Zhan 17 a esplorare l'elaborazione online di istruzioni semanticamente complesse, vale a dire, istruzioni disgiuntive S1 o S2 , dichiarazioni congiuntive S1 e S2 e ma -istruzioni S1 ma non-S2. Disgiuntive dichiarazioni come casella di Xiaoming contiene una mucca o un gallo sono tali espressioni.

Conti nella letteratura differiscono in se due inferenze siano processi grammaticali o pragmatico 22 , 23 , 24 , 25 , Please recommend JoVE to your librarian. Tutti i soggetti devono dare consenso informato scritto prima della gestione dei protocolli sperimentali. Tutte le procedure, moduli di consenso e il protocollo sperimentale sono stati approvati dal comitato etico di ricerca di la Beijing Language and Culture University. Uno studio di comprensione utilizzando il paradigma del mondo visivo normalmente prevede i passaggi seguenti: Le risposte del comportamento dei partecipanti sono riassunti nella Figura 4.

Criticamente, quale casella viene scelto per l'istruzione disgiuntiva S1 o S2 dipende da come viene elaborata un'istruzione disgiuntiva: La figura 4 illustra che quando comprendere una dichiarazione disgiuntiva S1 o S2 , i partecipanti calcolare entrambe le due inferenze. Inoltre, fissazioni occhio dei partecipanti sulla piccola scatola chiusa, soprattutto quando queste fissazioni sono seguite da risposte comportamentali su quella casella, anche suggeriscono che l'implicatura scalare e le inferenze di ignoranza sono computate.

Le due inferenze dovrebbero sono state elaborate entro e non oltre il primo punto temporale quando partecipanti spostano la loro attenzione visiva e fissazioni sulla piccola scatola chiusa. Movimenti oculari dei partecipanti sono riassunti nella Figura 5. Inoltre, questo aumento comincia no entro l'offset del tessuto connettivo disgiuntivo. Un esempio di immagini di prova usati nell'esperimento. Le caselle di blues, le linee tratteggiate e i pixel che denota la larghezza degli elementi sono solo a scopo di illustrazione e sono invisibili ai partecipanti.

Adattato da esperimento di Zhan L. Un esempio delle frasi test utilizzati nell'esperimento ristampato da L. Zhan 17 con autorizzazione. La struttura gerarchica di un tipico esperimento di eye tracking utilizzando il paradigma del mondo visivo. L'audio illustrato nell'immagine sono le traduzioni in inglese del cinese mandarino, usato nell'esperimento. Le risposte del comportamento dei partecipanti registrato nell'esperimento adattato da uno esperimento di Zhan L. Dei partecipanti movimenti osservati nell'esperimento oculari.

L'inizio ed il contrappeso dei connettivi sentenziale sono significati due linee verticali tratteggiate. Per condurre uno studio di mondo visivo, ci sono diversi passaggi critici da seguire. In primo luogo, i ricercatori intendono dedurre l'interpretazione del linguaggio uditivamente presentato tramite movimenti oculari dei partecipanti nel mondo visivo. In secondo luogo, acustiche spunti nella lingua parlata sono transitori e non ci sono nessuna segnatura acustica corrispondente unicamente determinata categoria linguistica.

A movimenti oculari dei partecipanti correttamente tempo-lock con l'insorgenza di alcuni marcatori linguistici, i ricercatori dovrebbero trovare un obiettivo e un modo coerente per definire il contorno di qualche struttura linguistica. Potranno subire modifiche su qualsiasi componente per soddisfare scopi specifici dei ricercatori. In secondo luogo, le espressioni vocali possono essere una parola 36 , una semplice frase 30 , 31 , un'istruzione semanticamente complessa 17 , 34 , 35 o un dialogo Il paradigma del mondo visivo, rispetto ad altre tecniche psicolinguistiche, ha diversi vantaggi unici.

Il paradigma del mondo visivo, rispetto ad altre tecniche di psicolinguistica, ha anche alcune limitazioni potenziali. D'ora in poi, il paradigma potrebbe non essere sensibile alle caratteristiche di conoscenza linguistica e l'esperienza che si trova fuori del chiuso-set che sono state stabilite su un determinato processo.

Il paradigma del mondo visivo Esplora essenzialmente l'integrazione delle informazioni di dominio visivo e le informazioni dal dominio uditivo.

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Teoricamente, qualsiasi informazione che possono essere elaborati da due domini sensazionali possono essere potenzialmente studiate utilizzando questo paradigma. Ad esempio, i ricercatori potrebbero utilizzare questa tecnica per vedere come le fissazioni dei partecipanti nel mondo visivo sono colpite da odori diversi, diversi tocchi, ecc. You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account. Skip to content Behavior. Your institution must subscribe to JoVE's Behavior section to access this content. Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access: Aprire ogni immagine uno ad uno con un editor di immagini ad es.

Fare clic su immagine di Dimensione della battuta per ridimensionare a x pixel. Invita uno studente laureando in pittura disegnare quattro caselle di luce verde, come illustrato nella Figura 1. Utilizzare l'editor di immagini per riscalare la grande scatola aperta a x pixel, la piccola scatola chiusa con le dimensioni di x pixel e due piccole scatole aperte a x pixel, rispettivamente.

Fare clic Pixelmator File Nuovo per costruire un modello del test immagine con le dimensioni di pixel. Trascinare gli animali e le caselle di posizioni di correzione viene illustrati nella Figura 1. Creare immagini di prova 60 come Figura 1 , con ogni immagine animale viene utilizzato due volte. Controbilanciare le posizioni spaziali delle quattro caselle tra le immagini. Stimoli di lingua parlata Progettazione di quattro frasi di prova corrispondenti a ogni immagine di test e test di frasi in totale ad essere registrato.

Le frasi di prova dovrebbero essere presentate nel linguaggio nativo che i partecipanti parlano. Reclutare un madrelingua femmina un madrelingua di cinese mandarino in questo esperimento per registrare quattro dichiarazioni di esempio come nella figura 2 , come pure l'audio di tutti gli animali utilizzati nell'esperimento. Sostituire i segmenti audio dei due animali nelle dichiarazioni di esempio con l'audio dei due animali utilizzati in ciascuna prova per creare l'elenco completo degli audio di prova.

In terzo luogo, fare clic salvare salvare come file wav per salvare l'istruzione modificato. Ripetere il processo per tutti gli elementi per essere cambiato e tutte le frasi di prova.

Availability

Se gli stimoli di lingua parlata sono frasi piuttosto che parole separate, tuttavia, questo metodo tradizionale ha varie carenze: In secondo luogo, la varianza tra la lunghezza delle diverse prove rende anche difficile combinare tutte le prove insieme per analisi statistiche. Per superare le carenze del metodo tradizionale di registrazione, viene proposto un metodo diverso per costruire gli audio di prova parlata. In secondo luogo, tutte le parole che cambia tra le prove inoltre sono state registrate in isolamento.

Infine, esempi di frasi sono state sostituite con le parole registrate per costruire l'elenco completo degli audio di prova. Rispetto al metodo tradizionale, il nuovo metodo ha diversi vantaggi. D'ora in poi, la naturalezza dell'audio di prova deve essere valutata prima che siano eleggibili per i test attuali Dividere le frasi di prova in quattro gruppi, ogni gruppo contenente 15 istruzioni congiuntive, 15 istruzioni disgiuntive, 15 istruzioni ma e frasi 15 filler.

Garantire che ogni partecipante rileva un solo gruppo di prove: Si tratta di affrontare il problema che se si ripete lo stesso stimolo, i partecipanti potrebbero essere abituarsi a questi stimoli e possibilmente anche diventando strategica su come hanno risposto agli stimoli.

Salvare tutte le informazioni importanti per quanto riguarda gli stimoli di test in un file delimitato da tabulazione txt, con ogni riga corrispondente a ciascuna delle prove. Assicurarsi che il file includa almeno le seguenti colonne: I partecipanti calcolare l'inferenza di ignoranza, ma non l'implicatura scalare, se le piccole scatole aperte saranno essere scartate, vale a dire. Selezionare il percorso del progetto. Verifica EyeLink esperimento e scegliere Eyelink plus dall'elenco a discesa.

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Experiment Builder viene utilizzato per compilare lo script sperimentale di presentare gli stimoli di prova e di registrare i movimenti degli occhi dei partecipanti, come pure le loro risposte comportamentali. Visualizzare la struttura gerarchica di un tipico esperimento di eye tracking utilizzando il paradigma del mondo visivo, come si vede nella Figura 3. Una sequenza inizia sempre con un nodo di inizio. Costruire la sequenza di esperimento Fare clic su File Aprire , passare alla directory di esperimento e doppio clic sul file graph.

Fare clic su modifica Library Manager Immagine Aggiungi per caricare le immagini nell'esperimento progetto. Allo stesso modo, fare clic su modifica Library Manager Audio Aggiungi per caricare l'audio nel progetto esperimento. Garantire che l'istruzione contiene le seguenti informazioni: Si deve premere la barra spaziatrice mentre fissazione sul punto. Successivamente, vedrete un'immagine di prova che consiste di quattro scatole stampati sullo schermo e sentire una frase di prova riprodotta tramite i due altoparlanti.

In alto a sinistra casellafreccia sinistra Top Box di destrafreccia su Inferiore sinistro scatolafreccia sinistra Casella a destra inferiorefreccia destra In ogni immagine di prova, vedrete quattro caselle situate a quattro quadranti e due animali contenenti nelle caselle. Le quattro caselle possono variare in due dimensioni: Le dimensioni di una scatola influiscono sul numero degli animali contenute nella cabina, ma non di nostra conoscenza epistemica su quella casella.

Se hai dimestichezza con lo scopo sperimentale e la procedura, siete pregati di informare lo sperimentatore e vi aiuteremo per eseguire l'occhio standard routine di calibrazione e validazione di rilevamento. Se avete domande, non esitate a chiedere. Trascinare un oggetto tastiera nello spazio di lavoro. Questo passaggio viene utilizzato alla fine della schermata di istruzioni Trascinare un oggetto sequenza nello spazio di lavoro e rinominarlo come blocco.

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